問題一、為什么藍(lán)耳病在許多場，經(jīng)常是免疫或不免疫都有發(fā)病很嚴(yán)重，帶來很大損失?
我想不光是藍(lán)耳病，在我國豬病都有一個(gè)共性問題，就是診斷的問題。很多豬場發(fā)病在臨床現(xiàn)場一看就診斷，或?qū)嶒?yàn)室一檢出藍(lán)耳病毒就診斷為藍(lán)耳病了。這里要強(qiáng)調(diào)的是：藍(lán)耳病毒的檢出 ≠ 藍(lán)耳病的存在。
病是一個(gè)因病原造成臨床影響的過程，而病原可以是潛伏在體內(nèi)，呈持續(xù)帶毒狀態(tài)，未見得一定有臨床問題。
另一方面，藍(lán)耳病現(xiàn)在大部分用活疫苗免疫防控，疫苗毒在一定的時(shí)間內(nèi)都是可檢出的，所以檢出的病毒如果不做鑒別檢驗(yàn)，可能會(huì)造成臨床上的誤診。
問題二、臨床上很多豬群檢出藍(lán)耳病毒已經(jīng)是常態(tài)，那么如何判斷這個(gè)豬場因?yàn)樗{(lán)耳病毒的存在造成了疫情呢?
第一，在最近沒有免疫的情況下，使用雙份血清的評價(jià)方式。
即豬場一直在持續(xù)監(jiān)測的狀態(tài)下，當(dāng)感到臨床不穩(wěn)定時(shí)采血檢測，和原來監(jiān)測時(shí)的檢測結(jié)果對比。
如果不穩(wěn)定時(shí)血清PRRSV抗體值突然升高，一下子有較大的變化，可以考慮是藍(lán)耳病毒帶來的影響。
第二，在一個(gè)場疫情的早期，對早期有代表性的發(fā)病豬及時(shí)剖檢、采樣送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測診斷。
如果不是在疫情早期采樣，或者已經(jīng)采用了各種方法治療一段時(shí)間后再去做檢測，可能得出的診斷結(jié)論就會(huì)是多種病原混合感染，而不是這次疫情的病原。可能現(xiàn)實(shí)中多數(shù)情況是，這個(gè)發(fā)病群等到檢測結(jié)果出來了再去采取措施控制已經(jīng)來不及了。
其實(shí)可以在發(fā)病初期在采樣檢測同時(shí)根據(jù)臨床判斷采取控制措施。這樣等診斷結(jié)果出來了，就算之前的判斷錯(cuò)誤，也可以證實(shí)本次發(fā)病的原因是什么，對今后的疫情防控也是有指導(dǎo)意義的。
問題三、藍(lán)耳病檢測采樣的靶組織和靶器官應(yīng)該是哪些呢?
對藍(lán)耳病來說血樣是很好的靶樣品，另外我們應(yīng)該對發(fā)病過程中臨床上有代表性的豬只進(jìn)行剖檢，采取病毒檢出率高的靶組織(藍(lán)耳病毒除了血液，扁桃體和肺是最重要的靶器官外，在肺門淋巴結(jié)和下頜淋巴結(jié)也可以檢出)。
作為藍(lán)耳病毒，其最重要的靶組織就是扁桃體和肺臟，血液作為最容易采集的樣品，在藍(lán)耳病的檢出中意義也是非常大的。
血液中病毒檢出時(shí)間較早，一般感染后3天左右就能從血液中檢出，同時(shí)持續(xù)的時(shí)間也非常長，可以達(dá)到2-3個(gè)月，所以作為活體檢測，血是最好的。作為死亡剖檢動(dòng)物來說，扁桃體和肺臟是最重要的靶器官。
問題四、關(guān)于藍(lán)耳病如何做鑒別診斷，耳朵發(fā)藍(lán)就一定是藍(lán)耳病嗎?在實(shí)驗(yàn)室檢測上如何區(qū)分高藍(lán)和經(jīng)典毒株?
并不是耳朵發(fā)藍(lán)一定是藍(lán)耳病，末梢循環(huán)障礙時(shí)耳朵都會(huì)發(fā)藍(lán)。
藍(lán)耳病有一個(gè)典型的癥狀，就是眼結(jié)膜炎，開始可能是漿液性的，后面可能會(huì)發(fā)展成粘液性的。
高致病性藍(lán)耳病時(shí)20-40%的豬有神經(jīng)癥狀，因?yàn)樗{(lán)耳病毒在后期會(huì)進(jìn)入到腦組織中，造成一些神經(jīng)癥狀，可以看到運(yùn)動(dòng)障礙、抽搐、后軀麻痹等。扁桃體出血、潰瘍，肺組織實(shí)變。
在敗血癥時(shí)可看到脾臟腫大淤血、梗死灶，但是這種腫大與豬瘟以及一些細(xì)菌性疾病時(shí)我們看到的脾腫是有區(qū)別的，除非后續(xù)繼發(fā)細(xì)菌感染，單一病毒造成的損傷是不太容易看到那種脾臟極度腫大的。
臨床上近年來在PRRSV鑒別檢驗(yàn)這塊要做的工作很多。我們檢測藍(lán)耳病毒所用的PCR方法可能是各種各樣的，有些可能直奔高致病藍(lán)耳病毒的檢測去了，有些可能檢測的是經(jīng)典藍(lán)耳。
事實(shí)上，在所有的病原檢測方法里，沒有所謂針對經(jīng)典藍(lán)耳病毒的，只有藍(lán)耳病毒通用的RT-PCR。因?yàn)樗{(lán)耳病毒通用檢測方法是針對藍(lán)耳病毒最保守的片段設(shè)計(jì)的引物，而引物不同靈敏度也不同，作為藍(lán)耳病毒的檢測方法來說，使用最保守片段引物是最靈敏的，我們用的通檢RT-PCR就是這樣的方法。
比如使用通檢的RT-PCR方法檢出十個(gè)樣品里面有八個(gè)陽性，而用檢變異株RT-PCR方法(引物)，十個(gè)里面檢出六個(gè)原來陽性較強(qiáng)的樣品。
不是說漏掉的那兩個(gè)弱陽性就是經(jīng)典株，是因?yàn)閮煞N方法的靈敏度不同造成那兩個(gè)弱陽性樣本就沒有被檢出，假如送去測序它們有可能都是變異株。所以說使用通檢RT-PCR方法只能告訴你檢出來是藍(lán)耳病毒陽性，而不能確定是哪個(gè)毒株。
而接下來再用檢變異株的RT-PCR方法檢顯示一部分陽性一部分陰性，是因?yàn)楹笠环N方法靈敏度比通檢的方法低，原來強(qiáng)陽性的現(xiàn)在檢出是陽，弱陽性的檢出就是陰了，而不能說那一部分變?yōu)殛幮缘木褪墙?jīng)典株。
有些場檢出藍(lán)耳既有高致病的也有經(jīng)典的，有可能是因?yàn)闄z測方法靈敏度不同造成的對檢測結(jié)果的理解誤區(qū)。在通檢陽性的結(jié)果下，需要再做鑒別檢驗(yàn)才能告訴你這個(gè)毒株是什么類型。
問題五、藍(lán)耳病與臨床癥狀相似的疾病如何做鑒別診斷?
對臨床癥狀相似或相同的病做鑒別診斷，這點(diǎn)非常重要。有些場在臨床診斷上，把其他疾病引發(fā)的癥狀歸結(jié)到藍(lán)耳病上。比如2012年在偽狂犬流行毒株造成的豬偽狂犬爆發(fā)場，發(fā)病豬肉眼看到與高致病性藍(lán)耳病相似的肺實(shí)變，但是做成組織切片就發(fā)現(xiàn)，情況大相徑庭。
病豬肺臟在組織學(xué)上看到的是壞死灶，這是偽狂犬的典型病變，因?yàn)閭慰袢【褪且栽钚詨乃罏榻M織學(xué)特點(diǎn)。但是藍(lán)耳病毒主要在肺泡2型細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增殖，肺組織除了間質(zhì)性肺炎沒有其他變化。
之后在肺免疫組化染色中檢出的是偽狂犬病毒而沒有藍(lán)耳病毒。這些臨床表現(xiàn)相似的疾病在組織學(xué)中可以清晰的做區(qū)分。
問題六、現(xiàn)在在藍(lán)耳病毒的檢測中還需要區(qū)別野毒和疫苗毒，那么豬場如何去區(qū)分是野毒感染還是疫苗毒，以及如何評價(jià)打苗以后的結(jié)果?怎么去做檢測?
實(shí)際上藍(lán)耳病毒的抗體檢測方法有很多，但是對現(xiàn)在大規(guī)模樣品檢測來說，ELISA是一個(gè)相對方便能夠在臨床上推廣應(yīng)用的方法。ELISA方法有很多商品化試劑盒，在國內(nèi)用的最多的是兩類。一類是N蛋白包被的試劑盒，一類是糖蛋白包被的試劑盒。
那么這兩類試劑盒的蛋白包被是一個(gè)什么關(guān)系呢?
與病毒免疫原性相關(guān)性更好的是膜上的糖蛋白，而病毒感染首先激發(fā)的是跟核酸相關(guān)的N蛋白。
那么在臨床下什么情況下該選什么蛋白包被的試劑盒呢?
N蛋白激發(fā)抗體產(chǎn)生時(shí)間很早，如果是一個(gè)沒有感染過藍(lán)耳病的地區(qū)或場，一定是用N蛋白來做防控預(yù)警。還有就是做雙份抗體的檢測，一旦出現(xiàn)N蛋白抗體在沒有免疫的情況下出現(xiàn)一個(gè)跳升，一定和藍(lán)耳病毒感染發(fā)病相關(guān)性很大。
而作為疫苗的免疫效果的，則與糖蛋白相關(guān)性大，N蛋白產(chǎn)生的抗體只代表是不是有感染，與中和抗體及攻毒保護(hù)結(jié)果相關(guān)性不大。N蛋白抗體出現(xiàn)早，但是持續(xù)時(shí)間相對短，且與免疫保護(hù)相關(guān)性較小。糖蛋白抗體產(chǎn)生時(shí)間晚，且持續(xù)時(shí)間長，與免疫保護(hù)相關(guān)性更好，所以通常用它來做免疫后抗體水平監(jiān)測，監(jiān)測豬群是否處在保護(hù)狀態(tài)。
PRRSV主要蛋白的作用
注：使用上述不同蛋白作為包被抗原的ELISA試劑盒，在臨床上可用于不同免疫和感染背景的豬群。
